Screening prenatale del DNA libero circolante per le aneuploidie mediante test cfDNA.

Lo screening per le aneuploidie fetali è cambiato significativamente da quando lo screening non invasivo del DNA libero cellulare (cfDNA) è diventato possibile effettuarlo.
La consulenza mira ad ampliare le conoscenze cliniche riguardo a queste tecnologie genomiche in evoluzione con linee guida aggiornate per lo screening delle aneuploidie dei cromosomi sessuali (SCA) e delle microdelezioni, nonché l’applicazione nelle gravidanze multifetali. Discuteremo anche le prestazioni del test cfDNA rispetto alle opzioni di screening convenzionali; la gestione dei risultati dei test non refertabili (descritti anche come “nessun risultato”, “nessuna diagnosi” o “bassa frazione fetale”); e dei risultati secondari imprevisti. L’importanza della consulenza pre-test è descritta in dettaglio, insieme a punti specifici da considerare quando si discute dello screening del cfDNA con le pazienti.
Cos’è lo screening del cfDNA
Il cfDNA è costituito da brevi frammenti di DNA placentare (~142 paia di basi) presenti nella circolazione materna durante la gravidanza. Questi segmenti di cfDNA vengono rilasciati nel flusso sanguigno materno in seguito alla morte cellulare o all’apoptosi delle cellule trofoblastiche. Il cfDNA placentare circola nel siero materno in un contesto di cfDNA di origine materna differenziato per dimensione del frammento di DNA, firme di metilazione specifiche della placenta e alleli polimorfici a singolo nucleotide [6]. La quantità di cfDNA placentare presente nel contesto del cfDNA materno aumenta con l’avanzare della gravidanza; generalmente, rappresenta dal 10% al 20% del cfDNA totale nel plasma materno, raggiungendo il picco tra la 10a e la 21a settimana di gestazione .
Lo screening prenatale del cfDNA (precedentemente denominato test prenatale non invasivo, o NIPT si può eseguire a partire dalla 10a settimana di gestazione.

Come viene eseguito lo screening del cfDNA?
Il test cfDNA si effettua tramite sequenziamento massivo parallelo di frammenti casuali in tutto il genoma valuta brevi sequenze di DNA vengono mappate su cromosomi specifici con successiva analisi del dosaggio per determinare se è presente DNA in eccesso dal cromosoma/i di interesse. Una seconda tecnica è l’analisi del polimorfismo a singolo nucleotide (SNP), che confronta migliaia di singole coppie di basi di DNA dal genotipo materno al DNA fetale circolante. Utilizzando un algoritmo bioinformatico, il laboratorio può identificare l’aneuploidia tramite rapporti asimmetrici della frequenza allelica attesa.

Quando valutare il caso di eseguire lo screening del cfDNA?
Le linee guida SMFM hanno riconosciuto il cfDNA come il test di screening più sensibile e specifico per le aneuploidie fetali comuni in tutte le pazienti ostetriche.
E’ importante eseguire la consulenza pre-test per consentire decisioni informate su tutte le opzioni di test, inclusi i test diagnostici spiegando che che lo screening del cfDNA non equivale a un test diagnostico e sottolineano l’importanza della consulenza pre-test e del consenso informato. Raccomandiamo che lo screening del cfDNA per le aneuploidie comuni (trisomie 21, 18 e 13) sia reso routinariamente disponibile a tutte le pazienti

In che modo lo screening del cfDNA si confronta con lo screening convenzionale?
E’ uno screening , anche se approfondito e di qualità , ma non è considerato diagnostico, nel caso di qualsiasi dubbio si deve passare ai test diagnostici classici più invasivi come i Villi Coriali o l’amniocentesi.
I pazienti possono considerare modalità di screening alternative o test diagnostici in base alla valutazione personalizzata del rischio, alla disponibilità di opzioni di test, al costo o al desiderio individuale di informazioni.
Lo screening del DNA libero (cfDNA) è utile a tutte le donne in gravidanza per analizzare più da vicino la genetica del bambino prima della nascita.
lo screening con cfDNA per le aneuploidie comuni (trisomie 21, 18 e 13) dovrebbe essere eseguito di routine a tutte le pazienti ostetriche
Dopo la consulenza pre-test, ogni paziente ha il diritto di proseguire o rifiutare lo screening genetico e i test diagnostici
Lo screening per condizionI di microdelezione dovrebbe essere valutato solo se uno dei genitori è portatore di tale situazione
Le pazienti che scelgono di sottoporsi allo screening con cfDNA per la delezione 22q11.2 dovrebbero farlo solo dopo un’adeguata consulenza pre-test.
Sebbene il numero di gravidanze affette sia limitato, i tassi di rilevazione associati alle trisomie 18 e 13 sembrano essere costantemente elevati nelle gravidanze gemellari e lo screening con cfDNA per queste condizioni è raccomandato
lo screening con cfDNA per l’aneuploidia dei cromosomi sessuali nelle gravidanze gemellari e lo screening con cfDNA per gemelli non è raccomandato

Quali sono i punti importanti per la consulenza pre-test per lo screening del cfDNA ?

L’operatore sanitario a cui si chiede un test di screening cfDNA (detto anche NIPT) deve fare una consulenza prenatale e spiegare alla coppia vantaggi e limiti del test, le opzioni disponibili e capire il bisogno di informazioni della coppia e dell’efficacia del test meglio definito come “screening prenatale con cfDNA”. lo screening prenatale con cfDNA “test prenatale non invasivo” non è diagnostico ma ha una alta qualità ed è più gradito dei test invasivi . Durante la consulenza pre-test deve essere spiegata chiaramente utilità e limiti dei test e che dall’esito si potrebbe richiedere ulteriori test per il feto o per il paziente. Anomalie nel cfDNA non compatibili con un’aneuploidia fetale possono indicare una patologia materna benigna o maligna (ad esempio, un risultato materno inaspettato) e richiedono quindi un’ulteriore valutazione
La consulenza pre-test per lo screening del cfDNA per chiarezza deve:
∙Spiegare che il cfDNA è un test di screening, i risultati non sono considerati diagnostici e che non è raccomandato prendere decisioni sulla gravidanza esclusivamente sulla base dei risultati del cfDNA.
∙ Fornire una spiegazione chiara dello screening del cfDNA, incluse le condizioni valutate, i limiti e il potenziale di risultati non informativi o imprevisti. Sottolineare che il cfDNA non esegue lo screening per tutte le possibili condizioni genetiche.
∙ Spiegare le opzioni di test alternative (sia test di screening che test diagnostici) in base alla valutazione personalizzata del rischio, al costo e al desiderio individuale di informazioni. ∙ Chiarire che ogni paziente ha la possibilità di sottoporsi o rifiutare test diagnostici o di screening.
∙ Discutere l’efficacia del test del cfDNA in una gravidanza singola o gemellare (VPP/valore predittivo negativo e sensibilità/specificità). Ribadire che il test diagnostico di conferma è raccomandato in caso di risultato positivo.
∙ Evidenziare la possibilità di risultati falsi positivi e falsi negativi con lo screening del cfDNA e spiegare le implicazioni di ciascuno.
∙ Spiegare la possibilità di ricevere risultati imprevisti a causa di variazioni cromosomiche materne o di condizioni di salute materne non note prima del test. Discutere la necessità di test di follow-up in tali casi.
∙ Offrire supporto e risorse a individui e coppie che richiedono ulteriore consulenza o guida.
∙ Documentare il processo decisionale informato e il piano per la restituzione dei risultati.

Quando il test indica un risultato positivo del cfDNA?
Un risultato positivo al test cfDNA indica una maggiore probabilità che il feto abbia una diagnosi genetica specifica. L’interpretazione di un test cfDNA positivo richiede un’attenta valutazione di molteplici fattori e un’analisi approfondita dei referti di laboratorio. Un calcolo utile per valutare la probabilità che un risultato positivo allo screening cfDNA indichi accuratamente la presenza di una specifica condizione o malattia in un feto.
la prevalenza delle trisomie autosomiche (trisomie 21, 18 e 13) aumenta con l’età materna, è molto più bassa in un paziente di 20 anni rispetto a un paziente di 40 anni, quindi un risultato positivo o “ad alto rischio” dello screening del cfDNA è molto più basso in un ventenne rispetto a un individuo di 40 anni
La prevalenza del 45,X non differisce significativamente in base all’età materna. A differenza delle comuni aneuploidie autosomiche, lo screening del cfDNA per il 45,X rimane costante indipendentemente dall’età materna.
A risultati ricevuti l’operatore sanitario deve incontrare la coppia per le spiegazioni del test eseguito
Quando il risultato del cfDNA indica una maggiore probabilità di una condizione genetica, consigliamo di consultare uno specialista che possa approfondire il risultato e proporre un test di conferma con risposta affermativa o negativa.
La coppia ha il diritto di decidere se desiderate o meno un test genetico, in base alle informazioni che desiderate sulla vostra gravidanza.
specialisti possono aiutarti a rispondere alle tue domande e offrirti supporto.
Un risultato positivo del cfDNA dovrebbe essere seguito da una consulenza genetica, un’indagine anatomica dettagliata e una raccomandazione per test diagnostici con villocentesi (CVS) o amniocentesi.

Raccomandazioni delle Linee Guida 2025
– si raccomanda che lo screening del DNA libero cellulare (cfDNA) per le aneuploidie comuni (trisomie 21, 18 e 13) sia reso di routine a tutte le pazienti in ostetricia.
– si raccomanda il cfDNA come test di screening più sensibile e specifico per le aneuploidie fetali comuni (trisomie 21, 18 e 13) in qualsiasi popolazione di pazienti. Dopo la consulenza pre-test, ogni paziente ha il diritto di proseguire o rifiutare lo screening genetico prenatale e i test diagnostici.
– Si raccomanda che lo screening per le aneuploidie dei cromosomi sessuali sia reso disponibile alle pazienti in ostetricia con adeguata consulenza pre-test.
– Non si raccomanda lo screening di routine nella popolazione generale per nessuna condizione di microdelezione. Le pazienti che scelgono di sottoporsi allo screening del cfDNA specificamente per la delezione 22q11.2 dovrebbero farlo solo dopo un’adeguata consulenza pre-test. Alle donne in gravidanza interessate a ottenere informazioni sul rischio di varianti del numero di copie fetali dovrebbe essere offerto un test diagnostico anziché lo screening del cfDNA per le sindromi da microdelezione.
– Si raccomanda il DNA libero circolante come opzione di screening di prima linea per la rilevazione della trisomia 21 nelle gravidanze gemellari.
– A causa della mancanza di dati, lo screening del cfDNA per l’aneuploidia dei cromosomi sessuali nelle gravidanze gemellari e lo screening del cfDNA per gravidanze multiple di ordine superiore non sono raccomandati.
– Non si raccomanda l’uso di routine del test del cfDNA per delezioni o duplicazioni di grandi numero di copie a livello del genoma
-i tassi di rilevazione associati alle trisomie 18 e 13 sembrano essere costantemente elevati nelle gravidanze gemellari, e lo screening del cfDNA per queste condizioni è raccomandato

Quando non è opportuno eseguire il test del DNA libero
∙ Obesità
∙ Età gestazionale precoce
∙ Presenza Aneuploidia
∙ Bassa frazione fetale
∙ Uso materno di eparina a basso peso molecolare
∙ Mosaicismo placentare confinato
∙ Gravidanza gemellare (inclusa la scomparsa del gemello)

Da Linee Guida SMFM2025